PCR multiplex ácido nucleico do tempo real da amplificação de Enterocytozoon Hepatopenaei-18s

Jogos ácidos nucleicos da detecção de Enterocytozoon hepatopenaei-18s (EHP-18S)

(Método PCR-fluorescente da ponta de prova)
 
 
Uso pretendido:
 
Este jogo é apropriado para a quarentena do hepatopenaei -18S de Enterocytozoon (EHP-18S) antes da compra das larvas nos camarões dessaliniza a planta para assegurar-se de que as larvas não levem o micróbio patogênico da doença. As empresas da cultura aquática conduziram a detecção específica de EHP na lama inferior de lagoas da cultura aquática com crescimento lento do camarão para excluir o perigo escondido do fígado e do parasitization intestinal do cytiworm.
 
Princípio:
 
Neste jogo, as primeiras demão sondam foram projetadas usando um fragmento específico do hepatopenaei -18S de Enterocytozoon (EHP-18S). A ponta de prova podia especificamente ligar a um molde do ADN no meio da região da amplificação da primeira demão. Durante o processo da extensão do PCR, a atividade do exonuclease da enzima de Taq cortou o 5" - terminal fluoróforo da ponta de prova e fê-lo livre no sistema de reação. Assim, o 3" - o grupo extinto extremidade foi separado, e a fluorescência foi emitida, que foi detectada pelo instrumento do PCR da fluorescência, e a detecção de ácido nucleico de eHP-18S foi realizada no sistema de reação completamente fechado.
 
Componentes principais:
 

 
Exigências da amostra:
 

1. Tipo da amostra

Plântulas: pai, ovos do camarão, plântulas, produtos padrão grosseiros

Lagoa: lama inferior, excremento, corpo da água

Isca: a isca viva, a isca refrigerada e a não-alto-temperatura trataram amostras da isca

2. Transporte

Prove a coleção e o transporte será realizado de acordo com NY/T 541. As amostras serão transportadas ao laboratório o mais cedo possível sob circunstâncias refrigeradas para evitar a gelo-aproximação amigável repetida.

3. Preservação da amostra

Pode ser armazenado por 24 horas em 2℃~8℃, e pode ser armazenado por muito tempo em -20℃.

 
Usando Micgene 242/244/244IVD e ABI QuantStudio 5:
 
os procedimentos são ajustados como abaixo:

FAM foi selecionado para o canal da detecção.
 
Os resultados da interpretação

Nota: O resultado é julgado para ser a área cinzenta, que precisa de ser verificada novamente. Se verifique novamente o resultado é valor do Ct < 45="" is="" considered="" as="" positive="">
 
Análise do resultado:
Análise automática usando a instrumentação
 
Controle da qualidade:
Controle negativo: Nenhuma curva óbvia da amplificação do canal da detecção de FAM;
Controle positivo: O canal de FAM mostrou a curva óbvia da amplificação, valor ≤30 do Ct;
 
As circunstâncias acima são estadas conformes simultaneamente na mesma experiência; de outra maneira, a experiência é inválida e reexaminar é exigido.